Millipore超濾管你真的用對了嗎丨內含干貨
來源：上海益啟生物科技有限公司瀏覽量：載入中...發布時間：2018.01.07
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事項NAmiconQ&A
Q: Amicon? Ultra超濾管的膜材質是什么?
A: Amicon? Ultra超濾管的膜材質為默克密理博特有的 Ultracel? 再生纖維素膜，生產工藝嚴格，截留分子量明確而精準，蛋白吸附損失最小。
Q: 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個蛋白的大小需要相差多少?
A: 按照經驗，我們推薦兩個蛋白的分子量要相差一個數量級(10倍)。
Q: Amicon? Ultra超濾管可以用于病毒濃縮么?
A: 可以。對于慢病毒，我們推薦Amincon?Ultra 100kDa; 對于腺病毒，推薦Amincon? Ultra 50kDa。具體的操作步驟，可以參考我們的病毒濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產品使用說明書。另提供AAV(腺相關病毒)的制備方法供參考。
Q: Amicon? Ultrar超濾管可以用酒精消毒滅菌么?
A: Amicon? Ultra與70%乙醇是兼容的，但是我們對滅菌處理的具體方法沒有做相關的測試，所以無法提供更進一步的參考信息。
Q: Amicon? Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌?
A: Amicon? Ultra都是采用熱封設計，不可以用高壓高溫滅菌。
Q: Amicon? Ultra超濾管是否不含RNA酶?
A: 我們不保證超濾管不包含RNA酶，建議您可以用0.1%DEPC在37度浸泡2小時，以完全滅活RNA酶C殘留的DEPC可以用Milli-Q?超純水洗滌除去。
Q: 用Amicon? Ultra超濾管去除去污劑是有什么需要注意的嗎?
A: 去污劑因其獨特的性質，當濃度大于臨界微團濃度(Critical Micelle Concentration, CMC)時，去污劑分子會聚集形成微團分子而改變分子構象，這有可能會影響去污劑的去除效果，具體的操作步驟請垂詢默克密理博技術支持專線400-889-1988-2分機。
Q: 我的蛋白在濃縮時出現了沉淀為什么?
A: 蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。我們建議蛋白濃縮后的最終濃度不超過20mg/ml。對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，我們建議的改進方法是：
1)離心力降為推薦離心力的30%-50%
2)改選擇截留分子量更大的過濾裝置(如原本選用10k，此時可以選擇30k)
3)在濃縮過程中取出超濾管，用槍頭反復吹吸幾次
Q: 濃縮后我發現濃縮液中沒有目的蛋白，可能的原因是?
A: 首先，Amicon? Ultra超濾管的最低起始蛋白濃度為25ug/ml.請確保您的樣本的起始濃度大于這個濃度。
其次，如果問題仍然出現，請不要丟棄您的樣本濾過液用以分析可能的原因：
1)如果您的樣本在濾過液中，那么請排查：
a) 您是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b) 使用的離心力是否是在最高范圍內?如果您使用的是rpm，請換算成相應的g離心，具體換算方法請參考：
https://www.msu.edu/~venkata1/gforce.htm
c) 離心機最近是否有校準過?
d) 您是否首次嘗試這個蛋白?如果能確保你用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話，那么有可能是您的目的蛋白的原因。
有時蛋白會因其本身的一些特性(構象差異)而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管(如原本選用30k，此時可以選擇10k)。
2)如果您的樣本也不在濾過液中：
a) 您的樣本起始蛋白濃度是否大于25ug/ml?
b) 您用來確定樣本濃度的方法是什么?是否可信?
c) 您的目的蛋白是不是沉淀了?如果是，具體解決方法請參考上面的關于蛋白沉淀問題的解釋。
Q: 有時候我用超濾離心管連水都離不下來，可能是什么原因?
A: Amicon? Ultra超濾膜中含有微量甘油。 如果出現這種情況，先用0.1N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用，如暫時不用，請保持潤濕狀態，避免重新干燥。
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