如何改變蛋白含量低，得到的WB信號弱？
來源：http://www.jinbailu.com/瀏覽量：載入中...發布時間：2021.12.24
WB實驗是研究蛋白常用的實驗之一，實驗流程相對簡單，但是碰到的問題也是不少，其中最常見的問題如下：
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信號太弱
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背景過高，背景很臟
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非特異性條帶過多
然后你不斷優化，加大上樣量；提高一抗、二抗濃度，想了很多辦法，看了很多網站和論壇，大家說了很多的原因，包括樣本不干凈，樣本有降解，抗體不特異，二抗不純，封閉液不干凈等等。
終于……崩潰了…
怎么辦呢？先看看我們是怎么優化的！
奇跡1
樣品：K562細胞全細胞裂解液。
（Lane 1: 25μg總蛋白；Lane 2: 5μg總蛋白；Lane 3: 2.5μg總蛋白）
一抗：anti-PKC（Ab－2）小鼠單抗（MC5）（貨號OP74），分別用5%脫脂奶粉PBST溶液（圖1圖A）和SignalBoost Solution1（圖1圖B）按照1：1000比例稀釋
二抗：Rabbit anti-mouse IgG，分別用5%脫脂奶粉PBST溶液（圖1圖A）和SignalBoost Solution 2（圖1圖B）按照1：10,000比例稀釋。
檢測：化學發光法（曝光30秒）
結果：
圖1
奇跡2
樣品：全細胞裂解液
一抗：anti-ERK1的抗體，分別用5%脫脂奶粉PBST溶液（圖2左圖）和SignalBoost Solution 1（圖2右圖）按照1：200比例稀釋
二抗：分別用5%脫脂奶粉PBST溶液（圖2左圖）和SignalBoost Solution2（圖2右圖）按照1：3000比例稀釋，室溫1小時
檢測：化學發光法（曝光5分鐘）
結果：
圖2
奇跡3
樣品：大鼠腦組織裂解液。
結果:
實驗中反復提到的Signal Boost是什么呢？
Signal Boost是德國默克公司經驗豐富的研發團隊經過不斷摸索，開發的免疫信號增強試劑盒（貨號：407207）。是一種用于免疫檢測的特殊配方的抗體稀釋液，可以促進抗原抗體特異性結合，產生比傳統方法高幾倍甚至十幾倍的信號強度，從而解決免疫檢測實驗中（比如免疫印跡，ELISA等）經常遇到的低靈敏度和高背景強度等問題，得到準確清晰的實驗結果。
SignalBoost 免疫信號增強試劑盒有幾大優勢：
SignalBoost簡單操作示意圖：
一抗：anti-SERT兔多抗，用2.5%脫脂奶粉PBST溶液（圖4圖A）按照1：1000比例稀釋；用SignalBoost Solution 1（圖4圖B）按照1：10,000比例稀釋。
二抗：anti-rabbit IgG，用2.5%脫脂奶粉PBST溶液（圖4圖A）按照1：1000比例稀釋；用SignalBoost Solution 2（圖4圖B）按照1：10,000比例稀釋。
試劑盒操作簡單方便，含有溶液1和2兩種即用型溶液，分別用做一抗和二抗的稀釋液，替代其他的傳統稀釋緩沖液，如TBS，TBST，PBS，PBST等。其余操作均按照標準的免疫檢測操作流程進行。此外，試劑盒中各組分對標記抗體的酶活性（辣根過氧化物酶HRP，堿性磷酸酶AP等）均沒有影響，可以用于化學發光，比色法，熒光法檢測實驗。
1.顯著改善信噪比，提高低豐度蛋白的檢測成功率，得到更好的結果；
2.與傳統的方法相比，最多可節省90%的抗體用量，大大節約了實驗成本；
3.使用方便，操作簡單。即用型溶液，不需任何前處理，節省時間和精力；
4.應用面廣?？捎糜赪B、ELISA、免疫斑點雜交等檢測實驗，與化學發光，比色法，熒光法兼容。
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